“液體活檢”在腫瘤早期診斷與治療監控中的作用

　　當前臨床證明可用于指導腫瘤診斷與監控治療的生物標志物將僅適用于少數人，如癌抗原125(CA-125)、癌胚抗原(CEA)和前列腺特異性抗原(PSA) 等。這些標志物也存在于無癌癥個體的血清中，同時在相當一部分晚期癌癥患者中，這些標記物并未升高，所以這些標志物對于腫瘤早期診斷所顯示的特異性與靈敏性不高。

　　隨著最近癌癥基因組測序研究中基因組信息的大量涌入，人們現在知道幾乎所有類型的癌癥都存在體細胞基因改變。這些改變包括單堿基替換、插入、缺失和易位(后者包括與基因融合、基因擴增或雜合性丟失相關的改變)。這些體細胞突變在正常細胞群中發生的頻率可以忽略不計，因此從生物學角度提供了獨特的生物標記物。

　　液體活檢(Liquid biopsy)是一種新的癌癥診斷方法，通過分析和取樣非固體生物組織來進行診斷，這些組織主要來自血液，但也來自其他體液，如尿液、唾液和腦脊液。腫瘤及其轉移釋放生物標記物，主要是循環腫瘤細胞(CTC)、無細胞核酸(cfDNA和cfRNAs)、細胞外小泡(如外小體)和腫瘤培養血小板(TEP)，可遠距離反映疾病。因此，液體檢查(LBs)代表了一種微創技術，允許診斷、實時監測癌癥演變和患者的分子隨訪。另外，LBs比組織活檢更能顯示腫瘤的異質性，因為整個腫瘤腫塊會向血液中釋放物質。

　　在癌癥患者中，cfDNA通過凋亡、壞死或主動釋放被腫瘤細胞釋放。這種DNA被稱為循環腫瘤DNA(ctDNA)，它包含癌細胞特有的突變。cfDNA可以從血漿或血清中分離出來，但血漿是首選的，以避免在凝血過程中血清可能被白細胞污染。在研究和臨床實踐中，通常很難獲得用于基因分析的腫瘤樣本。有些腫瘤只能通過細針穿刺(例如肺癌)獲得，但沒有足夠的材料用于基因分型，而在其他情況下，從不同的醫療中心獲取樣本可能很困難或耗時。此外，一旦對多發性轉移的患者開始靶向治療，臨床醫生經常尋找復發的早期證據或潛在耐藥機制，液體活檢在這種情況下尤其有價值。例如，他們可以提供腫瘤總負荷的時間測量值，以及識別治療過程中出現的特定突變。

　　ctDNA測序技術需要非常敏感和特異，以克服疾病早期ctDNA濃度低以及正常細胞cfDNA的存在可能導致假陽性?；赑CR的測序方法非常敏感，但只能檢測已知的變異。最常用的方法是實時定量PCR(qPCR)和數字PCR(dPCR)，前者快速、廉價，但只能檢測10%以上的突變等位基因片段(MAF)，一種超靈敏的檢測方法，將樣本分離成數千個平行的PCR反應，以減少背景噪聲，它可以檢測低于0.1%的MAF。滴滴dPCR(ddPCR)和BEAMing是目前用于cfDNA突變檢測的標準方法，靈敏度在0.01-0.1%之間。

　　基于下一代測序(NGS)的方法可以進行高通量分析，可以篩選未知的變異，也可以識別結構變異和拷貝數變異，但靈敏度比dPCR低(約1%)。已經開發了諸如安全測序系統(safe-SeqS)、標記擴增子深度測序(TAm-Seq)、離子擴增序列、通過深度測序進行癌癥個性化分析(CAPP-Seq)[29]和使用測序進行敏感突變檢測(SiMSen-Seq)等平臺。最近的進展也使LBs的全基因組測序成為可能。

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