ELISA 試劑盒的 常見問題分享
在你的LEGEND MAXTM ELISA試劑盒，有一個步驟，要求洗板子之前，增加樣本。這一步的目的是什么?
我們通常使用預涂板的穩定器。額外的洗滌步驟是為了在你開始化驗之前除去這些成分。如果不進行洗滌，對檢測性能的影響是可以忽略不計的。
在你的ELISA試劑盒中使用了哪些抗體克隆?
在我們的試劑盒中使用的抗體克隆的信息是專有的。但是，抗體的克隆性(多克隆性或單克隆性)和宿主種類可根據要求提供。
我應該用血清或血漿樣本進行ELISA實驗嗎?
這取決于你所分析的目標和你研究的細節。理想情況下，我們建議對感興趣的目標測定血清和血漿的差異，并確定用于定量的樣本類型。根據指標的不同，血清和血漿中的目標濃度可能存在差異。在制備血漿或血清樣品時，最重要的因素是制劑的一致性，以確保精確的測量。一般來說，血漿/血清樣品應不含微粒物質，不含過多的脂類，且無溶血現象。
這些類型的污染物會對背景造成影響，并對檢測的準確性產生不利影響。關鍵是每次都要以同樣的方式準備樣品。即以同樣的速度、同一時間離心樣品，離心后立即除去血清或血漿，同時對樣品進行摘錄和冷凍。避免反復凍融循環。
我的樣本中的分析物質含量可能很低。我可以用什么方法來改進檢測?
對于我們的傳奇MAX™和ELISA MAX™豪華格式，我們建議遵循提供的規程。如果與規程有偏差，我們無法保證套件的性能。如果您使用我們的ELISA MAX™標準格式，以下是一般建議：
· 通過增加洗滌次數和水洗之間的浸泡時間來控制背景噪聲。
· 控制分析精度。例如，在你的管道中要更加小心和一致，使用新鮮的紙巾來敲打盤子，以避免粘附素-HRP的污染，并增加洗滌量。
· 增加孵化時間。請注意，這通常也會增加背景，因此檢測靈敏度可能不一定會增加。
· 如果可能的話，集中你的樣本。
· 采用五參數Logistic曲線擬合方法，更準確地計算標準曲線下端樣品濃度。
在許多情況下，樣品可能只是含有很低到無法檢測到的分析物水平。無論你如何操縱檢測，你可能仍然無法獲得可檢測的濃度。
我們的ELISA試劑盒中沒有捕獲/檢測抗體。我們能用一種單獨的/單一的抗體來代替它嗎?
不，我們不建議使用獨立試劑來替換組件，如果您替換或組合了來自不同工具包/制造商的試劑，則不能保證該組件的性能。
我能用你的工具箱運行幾個樣本?
這將取決于你的樣品是一式兩份還是一式三份。例如，在添加標準之后，您可以運行80個沒有副本的樣本，或者一次運行40個樣本等等。
鍍膜后應如何存放?
如果涂布板不能立即使用，則應密封，并在4°C存放一夜。
我有多個MAX™ELISA試劑盒，我想同時運行。我可以為所有的工具包使用相同的洗滌緩沖液嗎?
在我們所有的傳說提供的最大™套件中提供的洗滌緩沖器是相同的，并且在這些套件中的洗滌緩沖瓶上的部件編號應該是相同的。對于ELISA MAX™Deluxe和ELISA MAX™標準集，我們在每個工具包的技術數據表上提供了洗滌緩沖液的配方。這個配方是相同的所有ELISA最大的™集。
我正在使用生物素和純化格式的同一抗體克隆，試圖建立我自己的ELISA，但我沒有成功。
如果您使用相同的克隆同時檢測和捕獲抗體，表位可能已經被其中一個抗體占據，并阻止了另一個抗體的結合。我們建議為捕獲和檢測抗體選擇不同的克隆。
我在哪里可以找到對ELISA檢測的疑難解答提示?
請咨詢我們的ELISA故障排除指南.
我什么時候應該使用圖例MAX™ELISA試劑盒與預涂層板?
圖例MAX™試劑盒是現成的，為方便使用而設計，并盡量減少對ELISA鍍膜和準備緩沖稀釋劑的要求.我們向新加入ELISAs的用戶推薦圖例MAX™工具包。
我的ELISA應該用哪種涂層緩沖液?
一般來說，我們建議使用PBS(pH7.4)或碳酸鹽緩沖液(pH9.5)。您所選擇的確切的涂層緩沖液可能取決于所檢測到的細胞因子。
為什么我們建議不要在ELISA緩沖液中使用疊氮化物?
疊氮是一種不可逆的HRP抑制劑。
你的ELISA試劑盒的靈敏度是多少?
如果您使用的是圖例MAX™或ELISA MAX™Deluxe格式，請參閱個別工具包的手冊，以獲得更多關于靈敏度的信息。我們不提供這一信息的ELISA最大™標準集，但在理論上，它應該匹配的ELISA最大™豪華格式，如果你使用所有的生物LEGEND試劑。
生物LEGEND ELISA產品的保質期是多少?
生物LEGEND MAX™ 工具包是保證3個月從收到之日起。ELISA MAX™集保證12個月后，收到日期。對于大量特定的保質期日期，請參閱每個產品上的盒子標簽.
我能用這個試劑盒提供的重組標準進行生物測試嗎?
不，我們不建議在任何其他應用中使用重組蛋白標準。試劑盒中包含的蛋白質標準已經校準，作為ELISA標準使用，并且沒有進行生物活性測試。此外，ELISA蛋白標準可能含有其他載體蛋白，而且沒有進行與我們相同的不育檢測。生物活性重組蛋白.
我能用組織培養級無菌板進行ELISA嗎?
沒有。組織培養板是為細胞培養而設計的，通常不具有較高的蛋白質結合能力。對于ELISAs，我們建議使用高蛋白結合板，如nunc Maxisorp™板(Cat. No. 423501).
我能否使用作為ELISA試劑盒的一部分提供的捕獲和檢測抗體，用于其他應用，如流式細胞術染色?
在我們的LEGEND ELISA試劑盒中使用的抗體已經在ELISA檢測中得到驗證，我們不能保證它們將在其他應用中起作用，比如流式細胞術。相反，我們建議您在這些實驗中使用流式細胞術驗證的抗體。
我能用你的ELISA試劑盒做我的組織樣本嗎?
一般來說，BioLegend的ELISA產品可以用于組織或細胞提取物/勻漿，只要樣品的制備方式與免疫反應相一致。為此，我們建議使用以下準則：
· 組織/細胞應在不含變性化學物質(如尿素、硫脲、SDS)的中性pH緩沖液中溶解或勻漿。
· 沒有或最低水平的洗滌劑(如SDS，Triton™X-100).
· 沒有過高的離子強度(鹽濃度大于生理離子強度)。
· 緩沖液應含有足夠的蛋白酶抑制劑混合物，以防止目標蛋白被細胞釋放的酶降解。
像血清這樣的樣品可以重復使用嗎?
我們不建議重復使用樣本。為了得到準確的結果，樣品應該被引用并儲存起來，只供一次使用.如果您決定重用一個樣本，您將需要執行額外的驗證實驗，以確保您能夠獲得準確的讀數。這將受到許多因素的影響，包括樣品的穩定性。
我能用你的配對ELISA抗體和另一家公司的蛋白質標準嗎?
如果抗體是作為試劑盒的一部分提供的，我們不建議聯合來自不同ELISA試劑盒的試劑。如果您將來自多個工具包或制造商的試劑組合在一起，我們無法保證該工具包的性能。如果你購買了個人抗體，并正在開發自己的ELISA，這可能是可能的，但需要進行測試。如果用于產生抗體的免疫原在序列或結構上與蛋白質標準不同，則抗體可能無法識別或顯示與蛋白質標準的結合不良。
在哪一步我可以推遲我的ELISA程序幾天?我可以冷凍我的盤子以備以后用嗎?
最好遵循建議的協議，不要再拖延。然而，如果你想暫停實驗，我們建議在阻斷步驟(在涂上捕獲抗體之后)推遲這個過程。在井中加入2 0 0μL的封堵緩沖液，隔夜將平板置于4°C(信號最小或無信號損失)，或在-2 0°C下凍結幾天(對信號可能有一定影響)。在第一步延遲程序(包被捕獲抗體超過16-20小時。在4°C)是不可取的，因為它可能導致高背景。
我用完了一些ELISA試劑盒，我能單獨購買嗎?
也許可以單獨購買一些組件。請聯系我們的技術服務小組并提供大量信息的試劑盒及其組件，以確定這是否可行。
我可以混合來自不同的ELISA最大的™集的試劑或用于其他應用?
這是不建議的。ELISA最大™試劑是針對某一特定批次進行優化的，除了ELISA之外，它們還沒有經過其他應用的質量測試。
用捕獲抗體包被的時間能比一夜長嗎?
一般建議在4°C下涂敷16-20小時.更長的孵育時間可能會增加結合在平板上的捕獲抗體的數量，這可能會增加背景噪聲。
我可否在標準曲線的較高端加一個額外的標準，以計算更高濃度的分析物?
我們不推薦這種做法。工具包的靈敏度取決于單個組件及其作為工具包的集體驗證，它不會通過在標準曲線上添加額外的點數而改變。
我是否可以在標準曲線的低端增加一個額外的標準，以提高我的檢測的靈敏度?
這也許是可能的，但你可能最終會在更高濃度的標準下形成信號平臺。一般建議使用用戶手冊中推薦的濃度范圍。
培養基中的酚紅是否干擾ELISA檢測?
不，細胞培養液中的酚紅不會干擾ELISA法的讀數。
對于你的一些ELISA試劑盒，為什么我的血清樣本需要稀釋分析緩沖液?
在某些情況下，需要用分析緩沖液稀釋，以盡量減少樣品與標準之間的矩陣差異，以獲得更高的準確度。
我怎樣才能獲得更好的信號和靈敏度為我的ELISA檢測?
增加孵育時間(樣本、檢測抗體或親和素-HRP或TMB底物)。請注意，這也可能增加背景在您的分析，并可能不會增加敏感性。
孵化過程中的搖動板。
確保在使用前完全重新制定標準。
·增加洗滌和洗滌之間的浸泡，以進一步減少背景。
·如果可能的話，在450到570(或最近)nm處閱讀版面，以進行背景減法。
·通過控制移液誤差或用更大體積的洗滌緩沖液洗滌來提高重復CV%。
·采用5-PL或4-PL曲線擬合方法，而不是線性擬合。這通常用曲線擬合軟件進行，并在曲線的低端提供更好的計算。
你的ELISA Kits和 Sets有什么區別?
這些試劑盒之間的主要區別是包括在試劑盒或集合中的試劑。
LEGEND MAX™：充分驗證和準備使用的工具包.它們包含所有所需的試劑，包括預涂有捕獲抗體的96孔條板。
ELISA MAX™：將檢測時間縮短到不到90分鐘。每個試劑盒都經過了充分的驗證，并包含了一個96孔的條狀板，它已經被預先包覆以固定捕獲抗體。
ELISA MAX™豪華：一個更具成本效益的選擇，包括大多數緩沖，預滴定抗體，重組標準和底物。板子不包括在這個套件中，必須單獨購買。
ELISA MAX™標準：提供完成ELISA的基本成分，包括重組蛋白標準、捕獲和檢測抗體以及親和素-HRP。這個集合需要一些優化，對于那些想通過提供自己的緩沖液和板子來擴展他們的預算的人來說是完美的。
ELISA MAX™豪華套裝是帶板子的嗎?
不，ELISA MAX™豪華套裝不帶板子。涂層緩沖液和分析稀釋劑(用于堵塞和稀釋)包括在這些套裝里。板子可以單獨訂購(Cat No. 423501)，有關涂布板的說明載于成套產品手冊中。
我能用不同公司的不同成分來做我的ELISA嗎?
不同的制造商在試劑盒中經常使用不同的抗體克隆?？贵w的特異性部分決定了檢測到了多少信號。
此外，不同的試劑盒可以使用用不同方法表達和純化的重組蛋白標準。例如，在大腸桿菌中表達的重組蛋白主要由于復性不一致而表現出不同的免疫反應性。套件標準是根據不同制造商之間的不同參考進行生產和校準的，因此很難比較來自不同套件的組件。每個BioLegend ELISA試劑盒都是根據試劑濃度和為分析穩健性優化的方案開發和驗證的。試劑(標準、抗體、匹配矩陣)和方案的任何改變都會影響最終的分析性能。
為什么我的樣本的細胞因子濃度與其他ELISA試劑盒不同?
在比較不同供應商的不同細胞因子試劑盒時，很難獲得完全相同的PG/ml濃度的樣品，部分原因是供應商可能使用對目標蛋白有不同免疫反應的不同試劑(包括抗體克隆)。細胞因子的濃度在試劑盒之間可能會有幾倍的變化，這并不罕見。
一般來說，尤其是在PG/mL范圍內的細胞因子，更重要的是要有匹配的生物學趨勢，而不是完全匹配濃度。這就是說，由不同供應商的不同試劑盒測量的相同的細胞因子在相關治療中應該表現出相同的生物變化模式。
某一特定分析物在生物樣品中的預期濃度(例如，NA、VE、動物或正常人的血清樣本中的濃度)是多少?
由于每個樣品都是獨特的，因此很難預測，因為這可能取決于樣品的制備和分析物的性質。
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